שיטת האבחון

אבחון מחלות מתחלק לשתי קבוצות עקריות:

אבחון עקיף
•  אבחון המסתמך על סימנים קליניים.
•  אבחון המבוסס על זיהוי נוגדנים לפתוגן, זיהוי התגובה החיסונית.

אבחון ישיר
•  זיהוי הפתוגן ע"י גידולו בתנאים המתאימים.
•  זיהוי הפתוגן ע"י צביעה נוגדנית ספציפית כנגדו בדוגמה הנבדקת
•  זיהוי הפתוגן ע"י הגברה של מקטע גנומי DNA ספציפי (אבחון מולקולרי)

אבחון מולקולרי
לכל יצור חי יש קוד גנטי DNA , אשר מקודד לכל מרכיביו. אורך הקוד משתנה מיצור ליצור ויכול להיות באורך של כמה אלפי בסיסים (וירוסים) ועד מיליוני בסיסים (אדם).

לצורך אבחון מולקולרי נבחר רצף (או מספר רצפים) ייחודי ושמור מגנום היצור, אשר מוגבר בשיטת ה PCR (Polymerase Chain Reaction) . בשיטה זו מוגבר המקטע משני צדדיו באופן מחזורי (עד 40 מחזורים). לאחר ההגברה, המקטע מורץ בג'ל ומסתדר על פי גודלו בהתאם למטען החשמלי ומצולם. הספציפיות מושגת מתכנון קפדני של רצפי התחלים המאפשרים את ההגברה, תנאים מדויקים לתהליך ההגברה (טמפ', תנאי סביבה כימיים וזמני מחזור)

במידה והפקת ה DNA איכותית והתנאים מדוייקים, ניתן לזהות מספר בודד של העתקים מגנום הפתוגן בדוגמה.

בבדיקת זוויג, מוגברים שני אזורים, המצויים על כרומוזומי המין הנקבי והזכרי. בציפורים בזכר יש את אותו כרומוזום פעמים W) ) ולכן מתקבל תוצר אחד ואילו בנקבה יש שני כרומוזומים שונים ( W ו Z ) כך שמתקבלים שני תוצרים.

יתרונות השיטה

  1. רגישות – ניתן לזהות את הפתוגן כשרמתו נמוכה בכמה סדרי גודל מבכל שיטה אחרת, ולכן ניתן לאבחן תחילת הדבקה או נשאות.*
  2. יציבות הדגימה – DNA הנו חומר יציב ביותר ולכן ניתן לשלוח את הדגימה בדואר או לשמורה לטווח ארוך.
  3. לצורך הבדיקה מספיקה כמות קטנה מאוד של חומר (דם, הפרשות או דגימה סביביתית) ולכן אין צורך בדימום מסיבי של בעל החיים.
  4. התהליך עצמו מהיר יחסית ואינו תלוי בגידול הפתוגן ולכן ניתן לאבחן במהירות גבוהה יחסית.

 

דוגמה של ג'ל לבדיקת זוויג בציפורים:

דוגמה של ג'ל לבדיקת מחלות:

* תשובה חיובית על ידי המעבדה מעידה על המצאות הפתוגן ולא בהכרח על מחלה. מחלה מאובחנת בשילוב סימנים קלינים על ידי וטרינר.

הסברים נוספים על השיטה ניתן למצאו בכתובת: http://users.ugent.be/~avierstr/principles/pcr.html

 

Real Time PCR
שיטה זו זהה עקרונית ל PCR ,אך קריאת התוצר מתבצעת תוך כדי התהליך ע"י סמן פלורוסנטי המשוחרר עם הגברת התוצר. יתרונה של השיטה הוא בעיקר במהירות התוצאה ובמידה וכמות הפתוגן נמוכה מאוד, ישנם מיקרים בהם הזיהוי הפלורוסנטי רגיש יותר מזיהוי בג'ל. בשיטה זו ניתן להשוות לכמות פתוגן ידועה ובכך לכמת את התוצר.

 

 




קרניאלי וט בע"מ רפואה וביוטכנולוגיה - המחלקה לאבחון מולקולרי וטרינרי | ת.ד 1121 קרית טבעון, 36015 | טלפון: 04-9536166 | דוא“ל: info@karnieli.com

האתר נבנה על ידי אינדיגו עיצוב ואתרים